روش آزمایش توالییابی سانگر (Sanger Sequencing)
توالییابی سانگر، که به نام توالییابی زنجیرهای نیز شناخته میشود، یکی از قدیمیترین و پرکاربردترین روشها برای تعیین توالی DNA است. این روش توسط فردریک سانگر و همکارانش در سال ۱۹۷۷ توسعه یافت و انقلابی در زمینه ژنتیک و زیستشناسی مولکولی ایجاد کرد. توالییابی سانگر به دلیل دقت بالا و قابلیت اطمینان، هنوز هم در بسیاری از آزمایشگاهها، از جمله آزمایشگاه دکتر شیخ الاسلامی، برای تعیین توالی DNA استفاده میشود.
اصول کلی توالییابی سانگر
توالییابی سانگر بر اساس سنتز زنجیره DNA و استفاده از دیاکسی نوکلئوتیدها (ddNTPs) انجام میشود. این دیاکسی نوکلئوتیدها به عنوان پایاندهندههای زنجیره عمل میکنند و باعث توقف سنتز DNA در موقعیتهای خاص میشوند. با استفاده از این روش، میتوان توالی دقیق نوکلئوتیدها در یک قطعه DNA را تعیین کرد.
مراحل انجام توالییابی سانگر
۱. تهیه نمونه DNA:
ابتدا DNA مورد نظر استخراج و خالصسازی میشود. سپس با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، قطعه DNA مورد نظر تکثیر میشود.
۲. واکنش توالییابی:
در این مرحله، DNA به عنوان الگو استفاده میشود و پرایمر به آن متصل میشود. در واکنش توالییابی، دیاکسی نوکلئوتیدها (ddNTPs) به همراه دئوکسی نوکلئوتیدها (dNTPs) اضافه میشوند. هر ddNTP با یک رنگ فلورسنت خاص برچسبگذاری شده است.
۳. الکتروفورز مویرگی:
پس از اتمام واکنش، محصولات به دست آمده با استفاده از الکتروفورز مویرگی جدا میشوند. هر قطعه DNA بر اساس طول آن جدا شده و توسط یک آشکارساز فلورسنت شناسایی میشود.
۴. تجزیه و تحلیل دادهها:
دادههای به دست آمده از الکتروفورز توسط نرمافزارهای تخصصی تحلیل میشوند و توالی دقیق DNA تعیین میگردد.
کاربردهای توالییابی سانگر
- تشخیص جهشهای ژنتیکی
- تایید نتایج توالییابی نسل جدید (NGS)
- تعیین توالی ژنهای خاص
- تحقیقات در زمینه ژنتیک و بیوتکنولوژی
مزایای توالییابی سانگر
- دقت بالا در تعیین توالی
- قابلیت اطمینان و تکرارپذیری
- مناسب برای توالییابی قطعات کوچک DNA
آزمایشگاه دکتر شیخ الاسلامی
در آزمایشگاه دکتر شیخ الاسلامی، توالییابی سانگر با استفاده از پیشرفتهترین تجهیزات و توسط تیمی متخصص انجام میشود. ما تعهد داریم تا با ارائه نتایج دقیق و قابل اعتماد، نیازهای تحقیقاتی و تشخیصی شما را برآورده کنیم.
برای اطلاعات بیشتر و درخواست خدمات، به وبسایت ما مراجعه کنید یا با شمارههای تماس آزمایشگاه در ارتباط باشید.
آزمایشگاه دکتر شیخ الاسلامی
تخصص، دقت، اطمینان
